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· 犬瘟热病毒南京分离株核蛋白基因的克隆、表达及其小鼠免疫应答
     根据GenBank 上发表的犬瘟热病毒(CDV)毒株序列设计一对跨越核衣壳(N)蛋白编码区的引物,采用RT-PCR 扩增CDV 南京分离株(CDV-NJ15)N 基因,并将其插入到pMD 18-T 中,构建克隆载体pMD-N。对克隆载体pMD-N 进行双酶切,将得到的CDV-NJ15 N 基因定向克隆到pcDNA3.1(-)真核表达质粒中, 通过磷酸钙介导转染COS-7 细胞,用SDS-PAGE 和Western-blot 分别鉴定表达产物的相对分子量及其免疫原性。结果证明获得正向插入的pcDNA-N 重组表达质粒,表达产物的相对分子量约58.2kD, 与预期值大小一致,且该表达产物能够被CDV-Onderstepoort 株的兔血清识别,表明构建的pcDNA-N 能在哺乳动物细胞中表达并且具有抗原性。以构建好的CDV N 和H 基因重组表达质粒pcDNA-N 和pcDNA-H 为DNA 疫苗,分组免疫5-6 周龄昆明小鼠,以2 周为间隔,共免疫4 次,最后一次免疫3 周后眼眶采血分离血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)和病毒中和试验(SN)分析DNA 免疫在小鼠体内诱导的免疫应答。结果显示pcDNA-N和pcDNA-H 单独免疫分别激发了102.69±0.149 和102.63±0.147 滴度的ELISA 抗体,联合免疫激发了102.93±0.165滴度的ELISA 抗体,低于弱毒疫苗产生的抗体滴度(103.35±0.252),两者差异显著(p<0.05)。两种质粒单独或联合免疫分别产生了100.903±0.252、100.963±0.252 和101.204±0.343 的中和抗体,与弱毒疫苗(101.88±0.151)比较差异极显著(p<0.01)。而空质粒pcDNA3.1(-)免疫后未检测到特异性的抗CDV 抗体, 表明表达CDV N和H 基因的重组质粒DNA 免疫小鼠可以诱导产生特异性体液免疫。
· 食蟹猴在延迟反应实验中的学习记忆能力与年龄的相关性
     随着世界人口平均寿命的增加,人类已经进入老龄化社会,患有不同程度脑老化也就是脑功能退化的人数大量增加。脑老化时常伴有注意力分散、学习记忆能力减退、社会适应能力下降等改变,这不但影响了老年人群的生活质量,也给社会增加了负担。脑老化时认知功能障碍的机理尚不清楚。非人灵长类具有高度发达的大脑联合皮质和相应复杂的认知功能,与人类的大脑联合皮质在结构功能方面具有相似性,因此可以通过建立学习与记忆的灵长类模型进行人类认知功能障碍的研究。本研究通过观察青年组和老年组食蟹猴在空间延迟反应实验中的学习和记忆能力差异,探讨年龄对食蟹猴空间工作记忆的影响。
· 荧光定量RT-PCR 在大鼠流行性出血热病毒检测、基因分型中的应用
     实验动物大鼠体型较小,遗传学较为一致,对实验条件反应较为近似,被誉为精密的生物研究工具,广泛用于生物医学中。大鼠流行性出血热(REHF)是由流行性出血热病毒(EHFV)引起的以发热、出血和肾脏损害为主要临床表现的烈性传染病,常见于人类,属自然疫源性疾病,宿主以啮齿动物为主。实验大鼠感染EHF 后多表现为隐性感染,一般不会影响实验研究的进程,但感染鼠可长期向外排毒,作为一类危害严重的人畜共患病,对实验和科研人员的影响是可怕的,必须引起重视。
· 卤虫生长在油田污染物毒性检测中的应用
     以体长作为观测指标,以半数有效浓度(EC50)进行量化,建立了卤虫Artemia sp.)无节幼体的生长毒性试验方法,探讨了该方法在油田污染物毒性检测中的应用,评价了生产水及钻屑的生物毒性。结果表明:5 个样品不同程度地抑制了卤虫幼体的生长,样品Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ的EC50 分别为770.37g/L,105.69g/L,114.29 g/L,体长指标比死亡指标具有更高的敏感性,卤虫生长毒性试验方法适用于油田污染物生物毒性监测,为油田污染物的排放管理及环境评价提供了依据。
· 海上采油平台生产水对卤虫生长的毒性的研究
     本文以南海区5 个油田开采平台的生产水样品对卤虫进行72h 毒性试验,研究了生产水对卤虫生长的影响,另外比较了两种体长测量方法的差异。结果表明:在实验浓度范围内,样品Ⅱ和样品Ⅴ未对卤虫生长表现出明显抑制作用;样品Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ则明显抑制卤虫生长,但抑制效果均低于25%,抑制的起始浓度分别为100、400、800g·L-1,无可见影响浓度(NOEC)与IC10 较为接近,这3 个样品对卤虫生长的NOEC 值分别为50、200、400g·L-1,IC10 分别为97.67、326.44、476.69g·L-1;两种体长测量方法在24h 时具有显著性差异,在48h 和72h 时无显著性差异。
· 恒河猴自发肾结核临床病理学观察
     观察恒河猴自发肾结核的病理学变化。
· 结核菌素用于猴结核病血清抗体检测的应用
     目前非人灵长类感染结核病的活体检测方法只能提供结核菌素试验,检测方法的单一,给饲 养和管理带来很大的影响。该方法在非人灵长类结核病检测中的敏感性和特异性差也逐渐被人们所认识,研究新的结核病检测方法一直是人们关注的重点。血清学检测方法是结核病检测的辅助手段之一,是结核菌素检测较好的补充手段。它适用于饲养群体中,对结核菌素无反应的动物群体的检测。因此,我们将探讨血清学检测方法在非人灵长类结核病感染中的应用。
· TCRVβ基因谱系分析在AIDS 疾病T 细胞克隆性研究中的应用
     运用RT-PCR 对反转录的目的cDNA 进行扩增,而后用此产物为模板进行二次PCR 扩增得到荧光产物;荧光产物通过序列分析仪的扫描进行TCRVβ基因谱系分析,并通过测定特定CDR3 长度及序列出现的频率来反映T 细胞克隆扩增的程度和功能状态,使我们更加了解AIDS 的免疫机制、药物或疫苗的治疗效果等。
· 应用套式RT-PCR检测实验大鼠和野鼠汉坦病毒
     我国是肾综合征出血热危害最为严重的国家,肾综合征出血热是由汉坦病毒引起的以发热、出血和肾脏损害为主要临床表现的烈性传染病。2001 年,正当我国“申奥”的关键时刻,北京发生了因使用质量不合格实验动物和动物实验不规范致使鼠源性人兽共患病流行性出血热感染和师生紧急预防接种的重大事件。
· 实验动物配合饲料安全与质量控制
     本文结合文献报道和省内实验动物配合饲料监督检验的结果,就实验动物配合饲料的安全现 状和保证饲料安全的措施进行了论述,认为规范管理、优良的饲料配方和定期的监测是生产出标准化实验动物配合饲料的关键,同时也对饲料常规营养成分检测过程中的一些注意事项进行了综述。
 
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